利用荧光能量共振转移研究解旋酶RecQ对DNA的解旋
张兴栋，窦硕星，谢 平，王鹏业*，奚绪光1
中国科学院物理研究所，北京凝聚态物理国家实验室，软物质物理实验室，邮编 100080
1 Laboratoire de Biotechnologies et Pharmacologie Génétique Appliquée CNRS UMR 8113, Ecole Normale Supérieure de Cachan, 61 Avenue du Président Wilson, 94235 Cachan cedex, France
摘要 应用荧光检测方法研究RecQ解旋酶的DNA解旋动力学特性。该方法基于停流动力学和荧光能量共振转移。六氯荧光素(hexachlorofluorescein)和荧光素(fluorescein) 分别标记在双链DNA互补链的5′ 和3′ 端。当荧光素标记的单链DNA因RecQ解旋作用而与互补链分离时，525nm处的荧光发射会增强，由此可对双链DNA的解旋进行观察。利用该方法，测定了不同酶浓度下RecQ的DNA解旋速度。就解旋幅度和解旋速度对镁离子浓度的依赖性也进行了研究。该方法将有助于进一步研究RecQ的解旋机理。在对衰老和肿瘤防治的研究日益加强的情况下，该方法将有利于寻找对RecQ变异所致疾病的有效抗癌药物。
关键词 解旋酶；DNA 解旋；动力学；停流；荧光能量共振转移