(03144)Liu G et al.:Molecular Cloning of mTSARG3 Gene Related toApoptosis in Mouse Spermatogenic Cells

Molecular
Cloning of mTSARG3 Gene Related to Apoptosis in Mouse Spermatogenic Cells

 

LIU
Gang, LU Guang-Xiu*, FU Jun-Jiang,
LIU Shang-Feng, XING Xiao-Wei

 

( Human Reproductive and stem cell Engineering
Institute, Central South University, Changsha 410078, China )

 

 

Abstract        Beginning
from a mouse EST (GenBank Accession No: BE644537) which was significantly
changed in cryptorchidism and represented a novel gene, GeneScan program was
performed and a predicted mouse novel gene full-length cDNA sequence containing
the BE644537 sequence was attained. Gene-specific primers were designed for PCR
in mouse testis cDNA library. The sequencing result of the PCR product showed
that we obtain a new gene mTSARG3(GenBank Accession No: AF419292) whose full
cDNA length is 1328 bp containing 8 exons and 7 introns. The predicted open
reading frame encodes a protein of 316 amino acid residues. The protein encoded
by the new gene is a new member of HSP40 protein family because the sequence
contains the highly conserved J domain which is present in all DnaJ-like
proteins and is considered to have a critical role in DnaJ-DnaK protein-protein
interactions. mTSARG3 protein displays a 46% identity in a 336-amino-acid overlap
with DJB4―MOUSE protein. The result of
RT-PCR analysis and Northern blot showed that mTSARG3 is specifically expressed
in mouse testis. Southern blot showed that there were no loss and rearrangement
in cryptorchid. Based upon all these observations, it is considered that the
function of the new gene is related to inhibit mouse testis spermatogenesis
apoptosis.

 

 

Key
words     gene cloning; PCR;
GeneScan; cryptorchid testis; heat shock protein (HSP); apoptosis

 

__________________________________________

 

Received:
May 7, 2003          Accepted:
October 27, 2003

 

This
work was supported by a grant from the Major State Basic Research Development
Program of China (973 Program) (No. G1999055901)

 

*Corresponding
author: Tel, 86-731-4373187; Fax, 86-731-4497661; e-mail, [email protected]

 

 

小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因mTSARG
3的克隆

 

刘刚    卢光�L*    傅俊江     刘上峰     邢晓为

 

（
中南大学生殖与干细胞工程研究所, 长沙 410078 ）

 

 

摘要       从在小鼠隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的EST片段(BE644537)出发, 利用GeneScan软件分析该片段所在染色体基因组序列, 获得一个包含该EST的新基因序列。 设计该基因特异性引物从小鼠睾丸cDNA文库中进行PCR扩增, 分离出小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因mTSARG3（GenBank登录号为AF419292）。 该基因定位于小鼠7号染色体7E1-E2区带, 全长为11
kb, cDNA全长为1328 bp, 包含8个外显子,
编码由316个氨基酸组成的、 分子量为36 kD的蛋白质。 该蛋白质含有DnaJ区和DnaJ－c区, 与热激蛋白40家族多种蛋白质有较高相似性, 其中与小鼠DJB4－MOUSE在336
aa的范围内有46%的相似性, 属热激蛋白40家族新成员。 多组织RT-PCR和Northern印迹结果显示,
该基因在小鼠睾丸组织高表达, 转录本大小约为1.35 kb; Southern杂交结果显示, 该基因在小鼠正常睾丸和隐睾组织无缺失和重排。
实验结果证明成功克隆到了一个小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因mTSARG3。

 

 

关键词   基因克隆; PCR; GeneScan软件; 隐睾;
热激蛋白; 凋亡

 

 

成年男性隐睾的发病率约为0.3％～0.7％,
患者睾丸有曲细精管和间质细胞的病理学改变及明显的生精损害, 单侧隐睾患者引起不育的比例为30%～60％, 双侧隐睾者更高达50％～100％,
由此可见隐睾是导致男性不育的一个重要因素, 其主要原因在于温度的改变引起隐睾患者精液中凋亡精子比例明显增多。 有研究表明,
有正常生育能力男性精液中的凋亡精子比例仅为0.1%, 而隐睾者达20%[1~3]。 所以克隆特异性的睾丸凋亡相关基因是进一步了解生殖细胞凋亡机制的关键所在, 对阐明精子发生的生理、 病理过程以及不育症的防治具有重要意义。

 

本室姜宏等[2]通过建立小鼠隐睾模型, 运用抑制消减杂交法（SSH）克隆出24个小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因的EST, 并在GenBank中登录。 本研究利用GeneScan软件分析和PCR等实验方法,
从上述EST中的BE644537出发,
成功地克隆了小鼠mTSARG3基因。

 

 

1    材料和方法（Materials
and Methods）

 

1.1   材料

 

50×Advantag
2 DNA聚合酶、 小鼠睾丸组织Marathon-ReadyTM
cDNA均购自Clontech公司。 各种PCR扩增引物由上海博亚公司合成, 电泳试剂、
LB培养基、 pUCm-T载体、 dNTP均购自上海生物工程公司,
测序由上海联合基因公司完成。

 

1.2   方法

 

1.2.1       新基因序列分析    用GenBank登录号为BE644537的EST为探针,
以小鼠EST数据库中的EST为模板进行电子杂交,
将其与得到的具有高度相似性的ESTs拼接成较长的EST, 将延长的EST片段与小鼠基因组草图进行比较, 获得该片段所在小鼠基因组序列, 利用GeneScan软件进行分析, 得到一个包含有登录号为BE644537的序列的基因序列。 将该序列与NCBI的nr数据库进行比较,
分析该序列是否代表一个新基因。

 

1.2.2       含完整编码区的cDNA克隆        根据新基因序列设计开放阅读框（ORF）全长PCR引物: MB1: 5′-CGGAATTCCCATGGGGCTGGATTACTATGCTGT-3′;

 

MB2:
5′-ACGCGTCGACTCAGGTCCCCCAGAATTAGGTCAG-3′。

 

为方便下游基因表达工作,
在引物两端设计有EcoRI和SalI酶切位点。 同时设计基因内部引物:

 

My1:
5′-TTTGAATTTTGGGGGGCTTTGGGG-3′;

 

My2:
5′-CTTCTTCTGGGGTGTGAGGCGGGT-3′。

 

内部引物用于PCR产物的验证。 使用引物MB1/MB2在小鼠睾丸cDNA文库中进行PCR扩增。 在10 μL的反应总体积中加入下列物质: 7.2 μL 5蒸水、 1 μL
10×Advantag 2 PCR缓冲液、 0.2 μL
50×dNTP、 0.2 μL
50×Advantag 2 DNA聚合酶混合物（4 u/μL）、 20 μmol/L的MB1 /MB2各
0.2 μL、 1 μL
Marathon-ReadyTM睾丸cDNA文库的cDNA （约200
ng）。 在PE9700型PCR扩增仪上完成PCR扩增, 条件如下:
95 ℃预变性90 s后, 94 ℃变性10
s, 58 ℃退火30 s, 72 ℃延伸2 min, 完成35个循环, 72 ℃
5 min, 置4 ℃保温。 然后使用基因内部引物My1/My2, 以第一轮PCR扩增产物为模板进行PCR扩增检测产物是否为目的片段 (条件同上,
退火温度改为60 ℃)。 2%琼脂糖电泳检测两次PCR产物大小。 将上述经琼脂糖电泳验证的PCR产物直接连接到pUCm-T载体上,
转化大肠杆菌JM105。
重组克隆在ABI377-3自动测序仪上完成测序。

 

1.2.3       多组织RT-PCR     按试剂盒（Promega）说明书抽提小鼠睾丸组织总RNA进行RT-PCR, 反应在PE9700 PCR仪上完成。 PCR反应体系: 7.1 μL五蒸水、
1 μL 5×反应缓冲液、 0.2 μL
50×dNTP、 0.2 μL
AMV、 0.2 μL Tf1 DNA聚合酶、
0.4 μL 25 mmol/L MgSO4、
引物(20 μmol/L)My1/My2 各0.2 μL、 0.5 μL
小鼠睾丸组织总RNA。
反应条件: 48 ℃逆转录反应45 min, 94 ℃预变性2
min, 94 ℃、 30 s, 60 ℃、 1 min, 68 ℃、
3 min, 完成40个循环, 68 ℃、
7 min, 4 ℃保温。 RT-PCR产物经2%的琼脂糖电泳验证片段大小后, 直接连接到pUCm-T载体上, 转化大肠杆菌JM105。
重组克隆在ABI377-3自动测序仪上完成测序。 同时扩增看家基因β–肌动蛋白基因作为对照。

 

1.2.4       Northern杂交        (1)Northern膜的制备抽提BALB/C小鼠脑、 心、
肝、 肺、 肾、
睾丸、 卵巢和脾组织RNA,
按《分子克隆实验指南》说明制备Northern膜, 每条泳道上样RNA约2 μg。

 

(2)Northern探针的制备使用引物MB1/MB2在小鼠睾丸cDNA文库中进行PCR扩增（程序同1.2.2）, PCR产物经2%的琼脂糖电泳验证片段大小后按Roche公司地高辛标记试剂盒说明书制备探针。

 

(3)预杂交加入65 ℃ 预热的HyB杂交液5
mL, 排净气泡, 封口。 65 ℃ 水浴振荡杂交1 h。

 

(4)杂交将标记好的探针于100 ℃ 煮沸10～15
min, 立即冰浴冷却10 min。
将预杂交的膜从水浴中取出, 尽可能排干袋中的预杂交液, 取5
mL新鲜的HyB杂交液（65 ℃ 预热）, 加入处理过的探针,
混匀。 加入到杂交袋中,
小心排尽气泡, 封口, 65 ℃ 水浴振荡杂交过夜。

 

(5)洗膜取膜放入含20 mL 2×SSC、 0.1% SDS溶液的平皿中,
在室温下振荡洗涤两次, 每次5 min。 然后放入0.1×SSC、 0.1%SDS溶液(50
℃水浴预热)中, 50 ℃水浴振荡洗涤两次,
每次15 min。
转入装有20 mL洗涤缓冲液的平皿中振荡洗涤5 min。 加入30 mL阻断溶液培育30
min。 再将膜转入30
mL抗体溶液中培育30 min。
在20 mL洗涤缓冲液中振荡洗涤两次, 每次15
min。

 

(6)显色将膜放入20 mL检测缓冲液中振荡洗涤5
min。 在10
mL检测缓冲液中加入200 μL的NBT/BCIP,
混匀, 将膜浸入显色液中, 显色过夜。 用灭菌双蒸水反复冲涤3～5次终止显色。 在成像系统上拍照, 记录结果。

 

1.2.5       Southern杂交        (1)PCR扩增使用引物MY1/MY2在小鼠睾丸cDNA文库中进行PCR扩增（程序同1.2.2）, 将20
μL PCR扩增产物于沸水中煮5 min, 迅速置冰上3
min。 按ECLTM随机引物标记检测试剂盒（Amersham Pharmacy）说明书, 在50
μL反应总体积中加入下列物质: 29 μL
5蒸水、 10 μL dNTP mix、
5 μL随机引物、 5 μL变性的模板DNA、
1 μL Klenow酶（5 u/μL）。
将上述物质混匀后于37 ℃保温3 h, 加EDTA至终浓度为20 mmol/L终止反应,
产物于－20 ℃冻存备用。

 

（2）Southern膜的制备查询小鼠基因组草图中mTSARG3基因的基因组序列, 证明该基因组序列中无SalI酶切位点。 常规酚/氯仿抽提小鼠隐睾和对侧正常睾丸组织基因组DNA, 分别用100单位的SalI酶37
℃过夜消化60 μL（约18
μg）基因组DNA。 1%琼脂糖凝胶电泳, 变性后采用纸巾转膜法将基因组DNA转至尼龙膜上。 将膜移至磷酸盐溶液（等体积的0.4 mol/L Na2HPO4和0.4 mol/L NaH2PO4混合, pH 6.8）中浸泡3
min, 夹在滤纸中干燥30 min。
120 mJ/cm2紫外线（254～312 nm）将DNA与尼龙膜交联3～5
min, 凝胶真空干燥仪上80 ℃烘烤2 h。 4 ℃保存备用。

 

（3）探针杂交按ECLTM随机引物标记检测试剂盒说明, 将尼龙膜在2×SSC中浸泡10
min后, 预杂交30 min。 换杂交液, 加入标记的变性探针,
60 ℃杂交过夜。 1×SSC、
0.1%SDS、 60 ℃、 15 min洗膜3次, 0.5×SSC、 0.1%SDS、
60 ℃、 15 min洗膜3次。 将膜浸入缓冲液A（100
mmol/L Tris-HCl, 600 mmol/L NaCl, pH 7.5）中1
min, 移入20×封闭稀释液中30 min, 交联液(1∶1000稀释抗体–荧光-HRP交联试剂于缓冲液A中, 0.5% BSA)中室温30
min, 洗脱液（0.1% Tween-20于缓冲液A）中洗脱3次, 每次10
min。 等体积混合检测溶液1和检测溶液2各2.5
mL, 滴加在膜正面上, 室温1 min后取出湿膜放入一塑料袋中,
去除气泡和皱纹, 压片2 h后冲片看结果。

 

1.2.6       基因结构和基因序列分析    用ExPASy服务器中的
Translate和NCBI中的ORF finder进行阅读框架的识别。
利用最新公布的小鼠基因组工作草图进行染色体定位。 以ProtParam
tool进行等电点和分子量计算; 以TMpred进行跨膜区分析;
以SignalP V1.1进行信号肽序列分析[4]; 以PSort
WWW Server进行蛋白质细胞内定位预测; 以Scanprosite进行蛋白质基序的分析;
以NCBI中的Blast程序（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Blast）进行核酸和蛋白质序列相似性和蛋白质结构功能域分析; 以ClustalW进行蛋白质多重对齐比较和进化分析。

 

 

2    结果（Result）

 

2.1   新基因序列分析

 

将已获得的在隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的EST片段BE644537（192 bp）[4]在美国国家生物信息中心的小鼠EST数据库中进行BLAST分析, 筛选出5个在100 bp以上的相似性在90%以上的EST, 进行拼接,
得到一个延长的EST片段, 以NCBI
ORF finder程序分析, 该片段包含一个不完整的阅读框, 但无EST支持继续延伸。 利用GeneScan软件进行分析该EST所在基因组序列,
获得一个951 bp的可能完整阅读框, 该序列与BE644537序列部分重叠, 将其拼接获得一个基因序列。

 

2.2   含完整编码区的cDNA克隆

 

根据预测基因序列设计两端带有酶切位点的ORF全长PCR引物MB1/MB2, 以Marathon-ReadyTM小鼠睾丸cDNA文库的cDNA为模板进行扩增, 将PCR扩增产物连接到pUCm-T载体上测序,
得到的扩增产物为985 bp, 与预测序列相同。 将其与NCBI nr数据库进行比较, 证明该序列代表一个新基因,
命名为mTSARG3 （GenBank登录号为AF419292）。
用ExPASy服务器中的Translate和NCBI中的ORF finder进行ORF的识别, mTSARG3基因cDNA全长为1328 bp, 其中含有951
bp的完整ORF, 编码316个氨基酸(图1), ORF起始处序列为GCCATGG,
符合Kozak规则。 201～203
bp处为起始密码子ATG, 1149～1151 bp处为终止密码子TAA,
在ATG 5′端有1个同一相位的终止密码子TGA,
3′端则有1个加尾信号AATAAA及polyA尾。
该基因包含8个外显子和7个内含子,
跨越11 kb, 内含子和外显子交界区均符合gt-ag规则(表1)。

 

 

Fig.1       cDNA and predicted protein
sequence of mTSARG3

 

Polyadenylation signal is underlined.
Stop codon is indicated by asterisk (*).

 

 

Table 1   Exon-intron junctions of mTSARG3 gene

 

Uppercase
and lowercase letters indicate exon and intron sequences respectively.
Conserved splice donor and acceptor dinucleotide sequences are indicated in
italic.

 

 

2.3   多组织RT-PCR

 

设计引物MY1/MY2,
抽提小鼠睾丸、 肝脏、 卵巢、 脑、 肌肉、 附睾、 肺脏、 脾脏、 心脏、 肾脏组织RNA进行RT-PCR, 在睾丸组织中得到一个556
bp的特异性产物（图2）, 同时β–肌动蛋白看家基因在各组织中均有表达。 将在睾丸组织中高表达片段测序, 测序结果与预测结果完全一致, 证明该基因在小鼠睾丸组织中高表达。

 

 

Fig.2       The agarose gel electrophoresis
analysis of mTSARG 3 gene expression in the various mouse tissues by RT-PCR

 

Above:
amplification of mTSARG3 in mouse multiple-tissue. Below: amplification of gene
β-actin in mouse
multiple-tissue. 1, kidney; 2, heart; 3, spleen; 4, lung; 5, epididymidis; 6,
skeletal muscle; 7, brain; 8, ovary; 9, liver; 10, testis; M, pUC Mix8 marker.

 

 

2.4   Northern杂交

 

结果显示mTSARG3基因在小鼠睾丸组织高表达, 大小约为1.35
kb(图3), β–肌动蛋白基因在小鼠各组织均有表达(图3)。

 

 

Fig.3       Northern blot analysis of mTSARG
3 in different tissues of mouse

 

Above: mTSARG3 probe. Below: β-actin probe. 1, brain; 2, heart; 3,
liver spleen; 4, lung; 5, kidney; 6, testis; 7, overy; 8, spleen; M, marker.

 

 

 

2.5   Southern杂交

 

mTSARG3基因在正常睾丸和隐睾组织中均为单一条带, 大小约为20 kb, 与预测相符, 提示无断裂和重排（图4）。

 

 

Fig.4       Southern blot analysis of mTSARG
3 in testis and cryptorchid of mouse

 

1, testis; 2, cryptorchid testis.

 

 

2.6   基因序列和蛋白质结构分析

 

将mTSARG3的cDNA全长与小鼠基因组序列进行相似性比较, 可将该基因精细定位至7号染色体7E1-7E2区带。 对mTSARG3编码蛋白质进行生物信息学分析, 显示该蛋白质理论等电点为7.02, 分子量为36 kD, 分子式为C1656H2561N433O465S6,
无跨膜区。 无信号肽序列,
推测为一非分泌性蛋白质。 经Psort
WWW Server分析65.2%的可能性位于细胞质内。 mTSARG3蛋白有以下模体:
1个DnaJ 结构域（位于氨基酸残基4～68）, 1个酪氨酸硫酸化位点,
4个PKC磷酸化位点, 3个酪蛋白激酶II
磷酸化位点, 1个酪氨酸激酶磷酸化位点以及3个N-肉豆蔻酰化位点。 BLAST结果显示该蛋白质为一新蛋白质, 含有DnaJ区（pfam00226）和DnaJ－c区（pfam01556）（图5）,
与小鼠DJB1－MOUSE、
DJB4－MOUSE、 DJB5－MOUSE、
人类HSP40、 HSC40、 果蝇DROJ1、
PSI－SCHPO、
酵母SIS1蛋白有较高相似性（在300氨基酸左右长度范围内具有最高46%、 最低30%的相似性）。 应用ClustalW进行蛋白质多重对齐比较显示, 9种HSP40家族蛋白质相似性较高区域为DnaJ区和DnaJ－c区（图6）, 其中DnaJ区为所有热激蛋白40共有的功能域。 进化树分析结果显示mTSARG3蛋白与果蝇PSI－SCHPO蛋白进化距离最为接近（图7）。

 

 

Fig.6       The result of ClustalW (1.82) multiple sequence alignment	Fig.5       The result of NCBI conserved domain search
	Fig.7       The result of ClustalW (1.82) guide tree

 

3    讨论(Discussion)

 

无论原核生物还是真核生物,
对于外界环境突然改变, 如热、 射线、 重金属、 毒素等, 均能引起热激蛋白(heat
shock protein, HSP)合成增加, 其他蛋白质合成减少[5]。 HSP作为细胞在生理条件下生存所必需, 不仅在抵抗应激损伤和保护细胞中发挥重要作用, 还参与几乎所有细胞生理过程, 如细胞分裂,
DNA复制、 转录,
蛋白质运输、 折叠、 聚集、 降解, 维持细胞骨架及膜功能等[6]。 该类蛋白质在进化上高度保守, 约占细胞内蛋白质总量的2%～5%, 存在于几乎所有细胞内腔隙中。
根据分子量、 诱导方式及功能,
HSP可分为小分子HSP(包括HSP40和HSP20)及HSP100、
90、 70、 60等。

 

我们从在隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的EST片段(BE644537)出发, 利用GeneScan软件分析和PCR等实验技术,
从小鼠睾丸cDNA文库中分离出小鼠睾丸凋亡相关基因mTSARG3, 多组织RT-PCR和Northern结果显示该基因在小鼠睾丸组织中高表达, Southern杂交结果显示该基因在正常睾丸和隐睾组织中均无缺失和重排。 生物信息学分析结果表明该基因编码蛋白质含有DnaJ区和DnaJ－c区,
与热激蛋白40家族多种蛋白质有较高相似性, 属于热激蛋白40家族新成员, 无跨膜区,
为一非分泌性蛋白质。 最可能位于细胞质内,
与已知HSP40蛋白特性相符。 研究证明, HSP40的N端都含有一个约70个氨基酸残基的J功能域,
借此可直接与HSP70作用促进其ATP酶的活性,
调节HSP70的功能[7], DnaJ－c区能调节与多肽的关系, 从而间接发挥抗凋亡作用。
HSP70分子伴侣的表达对多种刺激诱导的凋亡有抑制作用, 人类HSP70家族中的HSP72、 HSP73与细胞在温热作用中的自身保护、
热损伤后的修复和热耐受性的形成有密切关系。 Hsp70-2是两种仅在小鼠生精细胞中表达的HSP70之一[8].
带有Hsp70-2的突变基因的雄性小鼠(Hsp70-2[-/-])不育, 研究表明是由于该基因突变后, 生精细胞受阻于减数分裂前期进而凋亡, 导致精子缺乏[9]。 HSF(热激转录因子)可与HSP基因的HSE(热激元件)结合,
控制HSP的转录。 热激转录因子2基因剔除雄性小鼠（Hsf2[-/-]）也有生精细胞凋亡现象[10]。
HSP70家族蛋白抗凋亡机制可能与下列因素相关[11～14]: (1)对线粒体功能的保护作用;
(2)对SAPK/JNKs(应激活化蛋白激酶)的上行和下行激活途径的抑制作用; (3)抑制凋亡激活基因p53、 Bax的表达;
(4)抑制氧自由基的形成; (5)抑制凋亡信号转导中的蛋白水解酶。

 

综上所述,
我们成功克隆了一个小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因mTSARG3, 该基因编码蛋白质很可能协助HSP70发挥抗凋亡作用,
该蛋白质与何种HSP70蛋白、 以何种方式、 在什么阶段相互作用,
是我们很感兴趣的问题。 我们正在进行该基因的原核表达、
蛋白质纯化、 pEGFP定位等工作, 希望获得抗体后对小鼠隐睾模型不同时期睾丸组织和睾丸组织不同细胞进行Western 印迹实验,
进一步深入研究其生物功能。

 

 

References

 

1     Liu SF, Li LY, Fu JJ,
Liu G, Xing XW, Lu GX. Rapid identification of human testis spermatocyte
apoptosis-related gene, TSARG2, by nested PCR and draft human genome searching.
Acta Biochim Biophys Sin, 2002, 34: 378－382

 

2    Jiang H, Li LY, Lu GX.
Molecular cloning of genes related to apoptosis in spermatogenic cells of
mouse. Acta Biochim Biophys Sin, 2001, 33: 421－425

 

3     Baccetti B, Collodel G,
Piomboni P. Apoptosis in human ejaculated sperm cells (notulae seminologicae
9). J Submicrosc Cytol Pathol, 1996, 28: 587－596

 

4     Nielsen H, Engelbrecht
J, Brunak S, von Heijne G. Identification of prokaryotic and eukaryotic signal
peptides and prediction of their cleavage sites. Protein Eng, 1997, 10: 1－6

 

5     Multhoff G, Botzler C.
Heat-shock proteins and the immune response. Ann NY Acad Sci, 1998, 851: 86－93

 

6     Mager WH, de Kruijff
AJ. Stress-induced transcriptional activation. Microbiol Rev, 1995, 59(3): 506－531

 

7    Cyr DM, Langer T, Douglas MG.
DnaJ-like proteins: Molecular chaperones and specific regulators of Hsp70.
Trends Biochem Sci, 1994, 19: 176－181

 

8     Eddy EM. HSP70-2
heat-shock protein of mouse spermatogenic cells. J Exp Zool.1998, 282(1-2): 261－271

 

9     Dix DJ, Allen JW,
Collins BW, Poorman-Allen P, Mori C, Blizard DR, Brown PR et al. HSP70-2 is
required for desynapsis of synaptonemal complexes during meiotic prophase in
juvenile and adult mouse spermatocytes. Development, 1997, 124(22): 4595－4603

 

10    Kallio M, Chang Y, Manuel M,
Alastalo TP, Rallu M, Gitton Y, Pirkkala L et al. Brain abnormalities,
defective meiotic chromosome synapsis and female subfertility in HSF2 null
mice. EMBO J, 2002, 21(11): 2591－2601

 

11    Volloch V, Gabai VL, Rits S, Force
T, Sherman MY. HSP72 can protect cells from heat-induced apoptosis by
accelerating the inactivation of stress kinase JNK. Cell Stress Chaperones,
2000, 5(2): 139－147

 

12    Wyatt S, Mailhos C, Latchman
DS. Trigeminal ganglion neurons are protected by the heat shock proteins hsp70
and hsp90 from thermal stress but not from programmed cell death following
nerve growth factor withdrawal. Brain Res Mol Brain Res, 1996, 39(1-2): 52－56

 

13    Li WX, Chen CH, Ling CC, Li
GC. Apoptosis in heat-induced cell killing: The protective role of hsp-70 and
the sensitization effect of the c-myc gene. Radiat Res, 1996, 145(3): 324－330

 

14   Li H. The anti-apoptosis mechanism
of HSPs. Foreign Medical Sciences (Clinical Biochemistry and Lab Technology),
2000, 21(3): 118－120

 

 

Updated
at: 2003-12-16