新型融合蛋白抗HER2单链可变区抗体片断/白介素2的快速纯化
张伟云, YIP
Tak-Chun1, KWOK Cheuk-Sang2
南京大学医学院 南京210093; 1香港伊利沙伯医院临床肿瘤科，香港; 2美国国立医学中心希望城放射肿瘤学分部，Duarte, CA91010, 美国
摘要 将含有H520C9scFv-rhIL-2 融合基因的质粒pcDNA-H520C9scFv-rhIL-2转染人胚肾293细胞系，表达520C9scFv-hIL-2融合蛋白。转染的细胞在无血清培养基中生长三天后收集其培养上清液。采用抗人IL-2的鼠单克隆抗体与CNBr激活的Sepharose 4B反应制成融合蛋白的分离介质，用亲和层析方法将收集的培养上清进行纯化，收集洗脱液。采用ELISA，SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western印迹法检测鉴定纯化的融合蛋白。结果证实所收集洗脱液中确有融合蛋白存在，并且电泳及Western印迹法还证实其是高纯度且分子量约为45 kD的蛋白质。该融合蛋白经实验证实能够特异地与表达p185蛋白的肿瘤细胞SKOV3和 B16/neu 相结合，并且具有促进IL-2依赖细胞株CTLL-2增殖的作用。
关键词 单链Fv-IL-2; 293 细胞; 亲和层析