蛋白内含肽介导的重组人垂体腺苷酸环化酶激活肽的高效制备1
余榕捷 洪岸2 戴云 高媛
暨南大学生物工程研究所，广州 510632，中国
摘要 为利用蛋白内含肽介导的单柱纯化实现重组人垂体腺苷酸环化酶激活肽（the recombinant
Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide，rhPACAP）的高效制备，合成一个编码rhPACAP的基因，并克隆到大肠杆菌表达载体pKYB，重组表达质粒pKY-PAC转化表达宿主细胞ER2566。目的多肽与一个具自剪切功能的纯化标签融合表达，并接于其N端。融合蛋白PACAP-intein-CBD经亲和层析纯化后，DTT诱导蛋白内含肽自动切割，将目的多肽从几丁质亲和的纯化标签释放出来。利用人胰腺癌细胞株SW1990测定rhPACAP促进cAMP生成的活性。利用单柱纯化，1L的诱导培养物可收获22mg的纯度超过98%的rhPACAP。所制备的rhPACAP与天然的PACAP相比，在其N端多了一个甲硫氨酸（Met），但初步活性测定结果显示rhPACAP具有与PACAP38标准品相同的，促进SW1990细胞胞内cAMP合成的功能。本研究提供了一种高效制备具活性的重组人垂体腺苷酸环化酶激活肽的方法。
关键词 蛋白内含肽 重组人垂体腺苷酸环化酶激活肽（rhPACAP） 纯化