利用Tet-on系统在体外调控Cre重组酶介导的DNA重组
郭中敏 徐康1 岳颖 黄冰 邓新燕 钟女奇
洪迅 陈系古* 肖东*
中山大学实验动物中心，广州 510080
1中山大学第一附属医院，广州
510080
摘要 条件基因表达和基因剔除是研究发育和疾病相关基因功能的重要手段。与上述技术相结合，Cre/lox P系统介导的位点特异DNA重组已成为在各类种属上进行意向DNA操作的有力工具。我们拟将Utomo et al (1999)开发的普遍转基因表达系统和肝脏特异性启动子系统相结合，以整合Cre/lox
P系统和Tet-on系统各自优点，在转基因小鼠上时空调控Cre表达。为此，我们首先将肝脏特异的人载脂蛋白E启动子（apoE启动子）插入pCore
construct (Utomo et
al, 1999) 中rtTA 盒上游启动子克隆位点，以构建转基因表达载体pApoErtTA-tetO-Cre，随后在细胞重组系统（lox P-flanked STOP cassette-modified
BEL-7402 细胞）上成功展示Cre介导的严紧可调控的DNA重组，也就是说：无强力霉素（Doxycycline，Dox）时，因Cre不表达而无重组发生，而Dox存在时，Cre开始表达并诱导重组发生。总之，在细胞水平，Tet-on系统可严密调控Cre表达，这为在转基因小鼠上时空表达Cre重组酶奠定了坚实基础。
关键词 Tet-on系统；Cre重组酶；人载脂蛋白E启动子；普遍转基因表达系统
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国家自然科学基金项目(No. 30271177)，广东省自然科学基金项目 (No. 021903)和中国博士后基金(第二十九批)部分资助
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